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        3. 文章詳情

          全自動酶標儀的功能介紹及正確使用方法

          日期:2022-06-03 05:42
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          摘要:全自動酶標儀具有自動洗板、溫育、加樣等功能。在臨床實驗室實際工作中,實驗人員在使用全自動酶標儀進行測定操作時,有時難免會對酶標儀的一些性能指標準混亂,甚至對酶標儀的應用產生誤解。如酶標儀的陽性率較肉眼測定明顯提高。 1、全自動酶標儀采用垂直光路多通道(一般為8或12通道,也可單通道)檢測,一般為硅光管或光纖。除了測量通道外,一些酶標準儀器還具有一個參考通道,每次測量都可以進行自校準。酶標儀的吸光度范圍、線性、精密度和準確度可以反映酶標儀的光學系統功能。如果光學系統良好,上述指標應該更好。測量的準確...
          全自動酶標儀具有自動洗板、溫育、加樣等功能。在臨床實驗室實際工作中,實驗人員在使用全自動酶標儀進行測定操作時,有時難免會對酶標儀的一些性能指標準混亂,甚至對酶標儀的應用產生誤解。如酶標儀的陽性率較肉眼測定明顯提高。

          1、全自動酶標儀采用垂直光路多通道(一般為8或12通道,也可單通道)檢測,一般為硅光管或光纖。除了測量通道外,一些酶標準儀器還具有一個參考通道,每次測量都可以進行自校準。酶標儀的吸光度范圍、線性、精密度和準確度可以反映酶標儀的光學系統功能。如果光學系統良好,上述指標應該更好。測量的準確性直接關系到測量通道的均勻性。單通道可以避免不同通道造成的差異。

          2、 全自動酶標儀的波長在400-750nm或800nm之間,可以滿足ELISA的要求。目前國內常用的ELISA試劑盒是辣根過氧化物酶(HRP),底物通常是四甲基聯苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)。在過氧化氫存在下,酶被HRP氧化成2,2,2,二甲基偶氮苯(DAB)和苯醌。當pH值為5.0左右時,DAB在450nm波長處有較大吸收。當pH值降至l0時,較大吸收波長移到492nm,摩爾消光系數變大,顏色加深,因此通常用硫酸或鹽酸等強酸終止反應。TMB的氧化產物在450nm波長處具有較大的消光系數。如果HRP小,h:o:TMB過高,就會形成藍色的陽離子根。降低pH值可使藍色陽離子根轉化為黃色苯醌,以硫酸為終止劑可使產物穩定90min。因此,450nm和492nm是ELISA中常用的兩種方法。所有酶標儀均配有放置過濾器的自動轉換部件,可同時安裝6-8個過濾器。所有濾光片應包括上述兩個波長。一些酶標準儀器用490nm濾光片代替492nm濾光片,影響不大。除這兩種基本濾光片外,考慮到雙波長比色法的需要,還應設有620nm或630nm或650nm和405nm濾光片,其他濾光片可根據自身需要選擇。有時,一些實驗室需要使用酶標儀進行微量生化測定,因此酶標儀廠家對酶標儀的紫外檢測功能進行了擴展,需要340nm波長的濾光片。此時酶標儀的波長范圍為340-750nm或800nm。

          全自動酶標儀具有單波長和雙波長檢測功能。有時,用戶不知道在什么情況下使用單波長或雙波長檢測。所謂“單波長”,是用顯色裝置吸收較大的波長,即450nm或492nm進行比色測定;用“雙波長”與顯色裝置較大吸收波長450nm或492nm進行比色測定,用對特定顯色不敏感的波長630nm進行測定。酶標打印的終端吸光度是它們之間的差值。在630nm處獲得的吸光度是非特異性的,它是由指紋、灰塵、污垢等的吸收引起的。因此,在ELISA比色法中,建議使用雙波長,不需要空白孔。

          3、 測定的吸光度范圍一般為全自動酶標儀的吸光度。酶聯免疫吸附試驗的測定要求在1.5~1之間,早期酶標儀測定的吸光度一般在1.5~1之間。在12.5之間,但現在基本上已經擴大到3.5以上,并能保持良好的精度和線性。例如,labsystems的dragon wellscan MK-2的吸光度為0-3.5,MultiScan ascent的吸光度為0-4.0,線性誤差不大于0-4.0± 2.0%,在吸光度0.3-3.0范圍內,精密度的變異系數小于± 0.2%; 在3.0~4.0abs范圍內,精密度的變異系數小于0.2%。因此,酶標儀的吸光度范圍無需刻意追求,主要取決于吸光度在一定范圍內的線性和精密度。

          4、 酶標檢測速度是指完成比色測定所需的時間

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